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在基因組測序中，PCR擴(kuò)增似乎是繞不過去的一步。然而，PCR也帶來一些問題，包括不均勻擴(kuò)增，導(dǎo)致某些序列的比例過高。對目前的新一代測序（NGS）平臺而言，測序某些堿基組成上存在嚴(yán)重偏向的基因組區(qū)域仍是一大挑戰(zhàn)。在GEN雜志上，PatriciaFitzpatrickDimond博士介紹了PCR-Free的基因組測序。文庫制備的變革2009年，Sanger研究院的IwankaKozarewa博士及其同事介紹了一種無需擴(kuò)增的Illumina文庫制備方法（NatureMethods2...

生物通報(bào)道：在使用殺傷性武器的時候，不傷及無辜很重要，對于RNA干涉（RNAi）來說也是如此。RNAi是一種常用的基因失活工具，它的主要缺陷在于會引起序列特異性的脫靶效應(yīng)。這樣的脫靶效應(yīng)很難預(yù)測，因?yàn)閟iRNA能夠影響與它部分互補(bǔ)的序列，像miRNA那樣抑制基因的表達(dá)。要減少脫靶效應(yīng)，可以將針對同一mRNA的不同siRNA混合起來使用。這些siRNA作用于同一個目標(biāo)，每種siRNA的濃度得以降低，稀釋了各自的脫靶效應(yīng)。然而，這一策略在實(shí)際操作中面臨著兩個問題。其一，目前“Sm...

環(huán)狀RNA（CircularRNA,CircRNA），是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的特殊RNA分子，與線性RNA相比，穩(wěn)定性高，現(xiàn)已證實(shí)CircRNA廣泛存在于生物體內(nèi)，與線性RNA相比，穩(wěn)定性高，對microRNA具有重要調(diào)控作用。CircRNA于2012年被科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，2013年Nature雜志報(bào)道兩篇關(guān)于CircRNA的研究成果，由此關(guān)于CircRNA的研究開始引起科學(xué)家的重視。利用高通量測序技術(shù)可鑒定CircRNA在生物樣本中的種類、表達(dá)豐度及結(jié)構(gòu)，對CircRNA的研究...

在基因組測序中，PCR擴(kuò)增似乎是繞不過去的一步。然而，PCR也帶來一些問題，包括不均勻擴(kuò)增，導(dǎo)致某些序列的比例過高。對目前的新一代測序（NGS）平臺而言，測序某些堿基組成上存在嚴(yán)重偏向的基因組區(qū)域仍是一大挑戰(zhàn)。在GEN雜志上，PatriciaFitzpatrickDimond博士介紹了PCR-Free的基因組測序。文庫制備的變革2009年，Sanger研究院的IwankaKozarewa博士及其同事介紹了一種無需擴(kuò)增的Illumina文庫制備方法（NatureMethods2...

一個由德國、瑞典和美國組成的研究組在室溫條件下，利用LCLSX射線激光器，成功解碼一種重要G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)的3D結(jié)構(gòu)。同時驗(yàn)證了LCLSX射線激光器的可行性。相關(guān)文章發(fā)表于2013年12月20日的《science》雜志上。Science：利用新技術(shù)在天然條件下成功獲得g蛋白偶聯(lián)受體3D結(jié)構(gòu)GPCR功能GPCR是一個蛋白大家族，對人類健康有關(guān)鍵性作用，約40%的現(xiàn)代藥物都靶標(biāo)這類蛋白。與GPCR有關(guān)的疾病包括，高血壓、哮喘、精神分裂癥和帕金森癥。由于這類蛋白的重要性，...

溶血空斑形成試驗(yàn)是一種體外檢測單個抗體形成細(xì)胞(漿細(xì)胞)的方法，故又稱體外抗體形成細(xì)胞(PlaqueFormingCell,PFC)測定技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)不僅可以作為免疫基本理論研究的有力工具，廣泛地用于檢測產(chǎn)生IgM類型(包括其它各類免疫球蛋白及其亞類)的抗體形成細(xì)胞，它還可作為研究篩選抗腫瘤新藥以及研究中藥對抗體免疫功能影響的免疫學(xué)指標(biāo)。一、原理：溶血空斑形成試驗(yàn)的基本原理是將經(jīng)綿羊紅細(xì)胞免疫小鼠的脾細(xì)胞與一定量的綿羊紅細(xì)胞混合，在補(bǔ)體參與下，使抗體形成細(xì)胞周圍那些受到抗體分...

案例一：DAB染色后切片著色一片黃/背景深背景：奧運(yùn)會期間我們課題組研究生都在實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn)，許多從北京購買的試劑買不到，對我們的許多實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生了很大的影響。我以前一直用中杉金橋的Sp三步法染色試劑盒，效果不錯，在奧運(yùn)會期間我準(zhǔn)備做同批實(shí)驗(yàn)分不同批次酶免疫組化實(shí)驗(yàn)，*批組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果很好，抗體濃度感覺比較合適(SantaCruz公司1：200)，等做第二批時發(fā)現(xiàn)封閉血清不夠了，為了保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行，我又從福州邁新頂了一個SP試劑盒，同時抗體稀釋液也不夠了，我又重新從博士德公司買了一...

實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)胞中的DNA受1NHC1，60℃水解作用以后，核酸中的嘌呤堿很快*被除掉，使脫氧核糖中潛在的醛基獲得自由狀態(tài)。水解后，組織要經(jīng)水洗再移至希夫（Schiff）試劑中，希夫試劑即同露出來的醛基發(fā)生反應(yīng)，呈現(xiàn)紫紅色。這個反應(yīng)是Feulgen在1942年提出來的，是DNA的一個特異性檢查法。水解的時間很重要，因?yàn)楹怂岬乃庥袃蓚€過程，*，漂呤堿很快被除掉，脫氧核糖中潛在的醛基顯露出來，第二，組蛋白和核酸愈來愈多地被除掉。在短時間的水解作用以后，*個過程占優(yōu)勢，這時候用希夫...

本文討論的范圍包括RNA酶保護(hù)分析，northernblot，原位雜交，半定量RT-PCR和定量RT-PCR。本文不談具體protocol，是因?yàn)楦鞣N書籍和kit說明書上都有，主要說一些原則，而且大部分是失敗和成功的經(jīng)驗(yàn)，還有小組討論結(jié)果以及各種書里七零八落看的內(nèi)容，希望對大家有用?；虮磉_(dá)的定義：說到基因表達(dá)，是指RNA，還是蛋白？是指mRNA還是包括風(fēng)頭正旺的非編碼RNA？mRNA還有不翻譯的RNA呢。應(yīng)該說轉(zhuǎn)錄水平指的是RNA水平，而蛋白應(yīng)該叫翻譯水平？我們這里就特指編...

中文名：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)英文名稱：Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside用途：異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一種作用*的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。IPTG常用于需要誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶活性的克隆實(shí)驗(yàn)。它常與X-Gal或Bluo-Gal結(jié)合使用，用于重組細(xì)菌菌落的藍(lán)白篩選，這些菌落可以誘導(dǎo)lac操縱子在大腸桿菌中的表達(dá)。IPTG與lacI阻遏蛋白結(jié)合并改變其構(gòu)象而發(fā)揮作用，防止β-半乳糖苷...