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做Western實驗時,各種裂解液怎么選擇

更新時間:2017-02-28      瀏覽次數(shù):3657

Western 及 IP細(xì)胞裂解液、RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液的用途?
 
用于普通的Western 、IP或co-IP,我們推薦使用Western及IP細(xì)胞裂解液,該裂解液已被國內(nèi)各大研究機(jī)構(gòu)廣泛使用,用戶普遍反映很好。裂解細(xì)胞或組織后,沒有非常粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊形成,不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續(xù)操作。

另外該裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于磷酸化,蛋白的Western 檢測。對于某些特殊蛋白的IP,如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液效果不是非常理想,可以嘗試用RIPA裂解液(強(qiáng)、中或弱)或NP-40裂解液。如果發(fā)現(xiàn)IP的時候背景很高,即非特異的蛋白也被IP下來,則需要選用裂解強(qiáng)度較高的裂解液,例如RIPA裂解液(強(qiáng)或中)。

如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被IP下來,則說明裂解液的強(qiáng)度過強(qiáng),可以使用較為溫和的裂解液如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。對于某些難溶解蛋白的Western,如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液效果不是非常理想,可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液,例如RIPA裂解液(強(qiáng)、中)或SDS裂解液。

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