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促黃體生成激素放免試劑盒怎么操作

更新時間:2017-04-22      瀏覽次數(shù):1827

促黃體生成激素放免試劑盒基本信息簡介

中文名 促黃體生成激素;外文名  luteinizing hormone;屬于促性腺激素的一種 簡    稱 LH 亦稱促間質(zhì)細胞激素。促黃體生成激素是由腦垂體前葉嗜堿性細胞分泌的,它作用于成熟的卵胞,能引起排卵并生成黃體。還可促進黃體、內(nèi)莢膜和間質(zhì)細胞分泌動情素。在雄性動物,它作用于睪丸的間質(zhì)細胞促進其分泌雄性激素。由于雄性激素的作用,在第二性征發(fā)育過程中,精子完成發(fā)育。LH促進類固醇激素合成作用,據(jù)認為是以生成作為第二信息的cAMP為媒介的。LH為糖蛋白,分子量約3萬。在酸性溶液中,可解離成分子量約為15000的互不相同的兩個單基物(亞單位)。

羊的LH的兩條多肽鏈(單基物)的氨基酸排列已經(jīng)確定。其單基物之一與促卵泡激素(FSH)和促甲狀腺激素(TSH)的單基物之一方有著共同或相似的結(jié)構(gòu)。腦垂體分泌的LH,是受丘腦下部生成的黃體生成素釋放因子所促進的。

促黃體生成激素放免試劑盒操作方法簡介

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3、加酶標抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。

4、加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

5、終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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