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檢測高密度脂蛋白對于血清和組織樣本的處理方法匯總

更新時間:2018-05-15      瀏覽次數(shù):3035

檢測高密度脂蛋白對于血清和組織樣本的處理方法匯總?!

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 樣本處理:

血清(漿):直接測定,如超過線性范圍用生理鹽水稀釋后測定。 ②、培養(yǎng)液樣本:吸取培養(yǎng)液,1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清測定。

 [注]:一般建議細(xì)胞密度在 100萬個/ml以上。 ③、組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的勻漿介 質(zhì),冰水浴條件下機(jī)械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清液待測。

 [注]:1、如組織樣本為非高脂樣本,勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進(jìn)行提取。

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 2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿介質(zhì)可統(tǒng)一用無水乙醇進(jìn)行提取。 

細(xì)胞樣本: A、細(xì)胞收集:將制備好的細(xì)胞懸液取出,1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上清液,留細(xì)胞沉 淀;用等滲緩沖液(推薦0.1mol/L 、pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液)清洗1~2 次,同樣1000 轉(zhuǎn)/分,離心10 分鐘,棄上清液,留細(xì)胞沉淀;

 B、細(xì)胞破碎:加入 0.2~0.3ml 的勻漿介質(zhì)(推薦 0.1mol/L、pH7~7.4磷酸鹽緩沖液或生理 鹽水)進(jìn)行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W,3~5 秒/次,間隔 30 秒,重復(fù) 3~5  次)或手動勻漿,制備好的勻漿液不離心直接測定。也可采用裂解液裂解(推薦 TritonX-100,1~2%,裂解 30~40分鐘),裂解好的液體不離心直接測定。 

[注]:一般建議細(xì)胞密度在 100萬個/ml以上。破碎好的液體可顯微鏡觀察細(xì)胞是否破碎* 

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