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淺析WB實驗代測的4個條件及注意事項

更新時間:2020-04-13      瀏覽次數(shù):2366
   一:WB實驗代測的4個條件:
  1、凝膠洗脫:轉移期間蛋白質(zhì)必須從凝膠中洗脫出來,如果蛋白質(zhì)還截留在凝膠中,將無法在膜上進行分析。
  2、處理期間仍截留在膜上:在轉移后的處理過程中蛋白質(zhì)必須保持吸附在印跡膜上。
  3、吸附到膜上:在轉移過程中蛋白質(zhì)必須吸附到膜上,如果蛋白不吸附,將無法在膜上進行分析。
  4、處理過程中可接近:被吸附的蛋白質(zhì)必須能夠與檢測試劑接觸,如果蛋白質(zhì)被掩蓋則無法檢測。
  以上是小編為大家講解的產(chǎn)品代測的四個條件,那么小編接下來進一步講解基本過程及注意事項有哪些?
  二:WB實驗代測的基本過程:
  1、獲取細胞或組織裂解物。
  2、根據(jù)檢測蛋白的位置選擇合適的裂解。
  3、選擇合適的蛋白酶抑制劑,避免蛋白降解,從而保證檢測的準確性。
  4、蛋白定量。
  5、電泳分離蛋白質(zhì)。
  6、轉膜:根據(jù)不同的檢測目的和待測蛋白的特性,選擇合適的膜類型。
  7、封閉:去掉膜上多余的非特異性結合位點,降低背景。
  8、一抗孵育。
  三:WB實驗代測需要注意以下幾點:
  1、選擇適合檢測標本種屬的一抗。
  2、選擇單克隆抗體或者經(jīng)過親和純化的多克隆抗體。
  3、選擇適用于WB實驗方法的一抗。
  4、二抗孵育:孵育條件一般為室溫1-2小時。
  5、結果分析和檢測:凝膠成像系統(tǒng)檢測或者暗室曝光到膠片。
  6、底物孵育:選擇顯色或者化學發(fā)光底物。一般傾向于化學發(fā)光,靈敏度高且背景低,節(jié)省抗體用量。
  以上就是小編為大家介紹的全部內(nèi)容,希望對大家有所幫助。
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