WB實驗代測實驗步驟
1.收集蛋白樣品(Protein sample preparation)
可以使用適當?shù)牧呀庖?，例如Western及IP細胞裂解液、RIPA裂解液等，裂解貼壁細胞、懸浮細胞或組織樣品。對于某些特定的亞細胞組份蛋白，例如細胞核蛋白、細胞漿蛋白、線粒體蛋白等，可以參考相關文獻提取這些亞細胞組份蛋白，也可以使用試劑盒進行抽提，例如細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒
收集完蛋白樣品后，為確保每個蛋白樣品的上樣量一致，需要測定每個蛋白樣品的蛋白濃度。根據所使用的裂解液的不同，需要采用適當?shù)牡鞍诐舛葴y定方法。因為不同的蛋白濃度測定方法對于一些去垢劑和還原劑等的兼容性差別很大。
2.電泳(Electrophoresis)
(1)SDS-PAGE凝膠配制
SDS-PAGE凝膠可以參考一些文獻資料進行配制
(2)樣品處理
在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。使用5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以減小上樣體積，在相同體積的上樣孔內可以上樣更多的蛋白樣品。5X的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液可以參考相關文獻資料配制
(3)上樣與電泳
冷卻到室溫后，把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內即可。
更新時間：2018-04-17 
瀏覽次數(shù)：1277
您的位置：
