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信帆生物帶您了解:革蘭氏染色方法和染色原理

更新時間:2018-09-04      瀏覽次數(shù):1501

信帆生物帶您了解:革蘭氏染色方法和染色原理

革蘭氏染色主要用來區(qū)分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。先來介紹一下這個實(shí)驗(yàn)原理:

因?yàn)楦锾m氏陽性菌的細(xì)胞壁較厚,肽聚糖網(wǎng)層較厚且交聯(lián)致密,沒有類脂存在,而革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁薄,肽聚糖網(wǎng)層薄且交聯(lián)較差,外膜上存在較多的類脂。兩者的這些區(qū)別造成了在進(jìn)行革蘭氏染色后出現(xiàn)不同染色結(jié)果。

革蘭氏陽性菌:當(dāng)結(jié)晶紫染液和碘液相遇后,形成不溶性的有色復(fù)合物,當(dāng)用乙醇脫色時,因?yàn)榘w的失水,而使得肽聚糖交聯(lián)更加緊密,網(wǎng)孔縮小,把紫色復(fù)合物截留在細(xì)胞內(nèi),從而使細(xì)胞呈現(xiàn)紫色;而革蘭氏陰性菌與乙醇脫色時,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能截留形成的紫色復(fù)合物,所以呈現(xiàn)無色,再經(jīng)沙黃復(fù)染后呈現(xiàn)紅色。

革蘭氏染色方法:

1、涂片:利用移液槍吸取10ul的菌液滴在載玻片,用燒紅的涂菌棒涂抹均勻,面積適中。

2、干燥與固定:將載玻片放置在酒精燈火焰上方一定距離處,涂菌面向上,將菌液烤干,溫度不宜過高,炙烤不宜時間太長,固定就是將涂菌面向上,載玻片快速在火焰中過2-3次。

3、初染:在菌液面上滴加1-2滴草酸銨結(jié)晶紫,染色1min

4、水洗:在小股水流下沖洗,直至無色為止。

5、媒染:吸取300ul碘液滴在樣本上,染色1min。

6、水洗:在小股水流下沖洗,直至無色為止。

7、脫色:傾斜玻片,滴加95%的乙醇,約30s,再水洗一次。

8、復(fù)染:在樣本上滴加沙黃染液1-2滴,染色1min。

9、水洗:在小股水流下沖洗,直至流過玻片的水無色為止。

10、干燥與觀察:用紙擦去水,干燥后在顯微鏡下觀察,菌體呈現(xiàn)紫色的是革蘭氏陽性菌,呈現(xiàn)紅色的是革蘭氏陰性菌。

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