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鐵離子檢測試劑盒這么操作更

更新時間:2022-11-09      瀏覽次數(shù):520

鐵離子檢測試劑盒這么操作更準(zhǔn)確


描述:

鐵是人體必需的元素之一,對人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用,血液中鐵的含量不足,就會造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細胞內(nèi),各組織、器官包括各內(nèi)分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和肺組織內(nèi)含量較為豐富。成人體內(nèi)含鐵35克,大部分都以蛋白質(zhì)復(fù)合物形式存在,極少部分以離子的形態(tài)存在。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細胞鐵離子,線性范圍5~300uM。產(chǎn)品包括標(biāo)準(zhǔn)品和空白對照,本試劑盒可進行100個樣品的檢測。



原理:

鐵與蛋白結(jié)合成復(fù)合物,在酸性介質(zhì)中鐵從復(fù)合物中解離出來,再被還原劑還原成二價鐵,并與亞鐵嗪生成紫紅色化合物,在540-580nm處可比色測定。 其反應(yīng)如下圖所示:



組成:

1. 細胞裂解液: 20 ml

2. 緩沖液: 5ml

3. 檢測劑: 3ml

4. 標(biāo)準(zhǔn)品: 1ml

5. 稀釋用液: 20ml

儲存:4℃保存,6個月有效。

適用范圍:該試劑盒可用于培養(yǎng)細胞中鐵離子定量檢測。

用戶自備:4.5%高錳酸鉀溶液5ml(0.225g高錳酸鉀溶解于5ml純水中)

操作步驟:

1. 樣品準(zhǔn)備:

實驗建議使用六孔板培養(yǎng)細胞。將DMEM培養(yǎng)過的細胞用冷的PBS 2ml洗兩遍,將PBS吸棄(若不馬上檢測可將其凍存于-20℃)。200ul/孔(或根據(jù)實際情況適量增減)裂解液裂解細胞,置于搖床裂解2h

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:用試劑盒提供的稀釋用液將3mM 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為:300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設(shè)置0濃度對照反應(yīng)管。

3. 將緩沖液與4.5%高錳酸鉀溶液按1:1混勻,稱為混液A

4. 參考下表使用1.5ml離心管,設(shè)置空白對照管、標(biāo)準(zhǔn)品管和樣品管。如果樣品中的鐵元素含量過高,用裂解液適當(dāng)稀釋后再進行測定。


空白對照

稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品

裂解的樣品

稀釋用液

100μl


混液A

100μl

100μl

100μl

樣品

100μl

標(biāo)準(zhǔn)品工作液

100μl

5. 混勻,60℃ 孵育1h。

6. 冷卻至室溫,將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。

7. 加入30ul 鐵離子檢測劑,混勻,室溫孵育,30min。此步可能產(chǎn)生絡(luò)合物沉淀,用移液器輕輕吹打即可溶解,若沉淀不溶,12000rpm離心5分鐘,取上層清液即可。

8. 200ul 96孔板,在550nm測定吸光度。如果不能測定550nm,也可以在540nm~580nm范圍內(nèi)檢測。

9. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算鐵離子濃度。

說明:


1. 本試劑盒不受錳離子、鎂離子、鎳離子和鋅離子等的干擾。
2. 操作過程中,樣品與試劑等避免與鐵器接觸,以防污染。

3. 所測樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限,應(yīng)稀釋樣品后重新測定。

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作,檢測試劑有腐蝕性,請小心操作,若不慎沾到皮膚上請馬上用清水沖洗干凈。

5. 該試劑盒僅供科學(xué)研究使用。


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