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植物過(guò)氧化氫DAB染色液的使用方法

更新時(shí)間:2022-11-23      瀏覽次數(shù):8308

植物過(guò)氧化氫DAB染色液的使用方法


使用方法

1. 試劑準(zhǔn)備:將100 mg DAB以磷酸緩沖液100 mL充分溶解,得到DAB染色工作液,避光4℃保存,一周內(nèi)有效。注:DAB對(duì)光敏感,溶解過(guò)程需要避光,如果較難溶解,可通過(guò)超聲、磁力攪拌等方法促進(jìn)溶解。

2. 采集經(jīng)脅迫(例如重金屬)的植物幼苗或根尖,純水稍洗凈,置于濾紙上吸干多余的水分。將植物幼苗或根尖浸沒(méi)在DAB染色工作染液中,常溫避光染色2-6 h,至陽(yáng)性部位出現(xiàn)深棕色,其余部位近無(wú)色或者呈植物本身的顏色即可。(根據(jù)植物幼嫩程度、顯色程度調(diào)整染色時(shí)間)

3. 用鑷子將植株幼苗或者葉片小心取出,浸入純水中來(lái)回漂洗3-5次,置于濾紙上吸干多余水分后,浸入95%乙醇中40℃處理3-16 h,目的是脫去植株幼苗或者葉片本身的葉綠素,脫色期間可多次更換新鮮的95%乙醇。

4. 用鑷子取出植株幼苗或者葉片,浸入純水中來(lái)回漂洗3-5次,置于濾紙上吸干多余水分后,將樣本轉(zhuǎn)入適量DAB樣本保存液中浸泡30 min,隨后可取出拍照。樣本可置于該保存液中常溫保存一周。


注意事項(xiàng)

1. DAB染色工作液配制好以后需4℃避光保存,一周內(nèi)使用。存放時(shí)間過(guò)久,會(huì)影響顯色。

2. 因過(guò)氧化氫容易分解,且任何外在因素都可能刺激植物應(yīng)激產(chǎn)生過(guò)氧化氫,因此植物樣本需要新鮮采集,并盡快完成染色。建議做陰性及陽(yáng)性空白對(duì)照組。

3. 樣本染色完成后盡快拍照保存結(jié)果。

4. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服,并佩戴一次性手套。


植物過(guò)氧化氫DAB染色液的使用方法


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