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環(huán)氧-瓊脂糖凝膠FF的使用方法您知道嗎?

更新時間:2022-12-20      瀏覽次數(shù):559

環(huán)氧-瓊脂糖凝膠FF的使用方法您知道嗎?


環(huán)氧-瓊脂糖凝膠FF是一種將環(huán)氧基團(tuán)鍵合在瓊脂糖微球上形成的活化層析分離介質(zhì)中間體。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu),與生物活性大分子有很好的相容性,具有高活化基團(tuán)密度,適用于帶適用于氨基、羥基、巰基等基團(tuán)的配基的偶聯(lián),偶聯(lián)效率高。


技術(shù)指標(biāo):

外觀

乳白色半透明凝膠狀凝膠

基質(zhì)

4%瓊脂糖凝膠

配體

環(huán)氧

配體密度

≥15 μmol/mL

蛋白質(zhì)偶聯(lián)量

≥10 mg/ml IgG

最大流速

300 cm/h

耐反壓

0.3 MPa

推薦流速

50 ~ 100 cm/h

粒徑范圍

60 ~ 180μm

工作溫度

4 ~ 40℃

基質(zhì)pH穩(wěn)定性

3 ~ 12(長時間);2 ~ 14(短時間)

基質(zhì)化學(xué)穩(wěn)定性

在以下溶液中穩(wěn)定:常用的水相緩沖液;1 mol/L NaOH;1 mol/L乙酸(pH 4.0);6 mol/L鹽酸胍;70%乙醇。


使用方法:

   1. 在配基偶聯(lián)前,準(zhǔn)備好所有的樣品、溶液、緩沖液等,盡量減少每一步操作之間的間隙。

  2. 偶聯(lián)前用蒸餾水洗滌10個體積以上,去除保存液。

  3. 根據(jù)目標(biāo)配基選擇偶聯(lián)溶液體系,一般情況下巰基偶聯(lián)pH為7 ~ 9,氨基偶聯(lián)pH為9 ~ 11,羥基偶聯(lián)pH為>11。

  4. 可以在20 ~ 40℃下偶聯(lián),一般提高溫度能加速偶聯(lián),在偶聯(lián)效果不好的情況下,可以提高溫度至35℃以上,但要考慮配基的穩(wěn)定性。

  5. 偶聯(lián)時間依據(jù)反應(yīng)速度而定,通常可偶聯(lián)過夜(16 h)。

  6. 偶聯(lián)配基后,剩余環(huán)氧基團(tuán)需要封閉,可用半胱氨酸、乙醇胺、甘氨酸等小分子試劑封閉數(shù)小時,如0.2 M Na2CO3, 0.1 M 乙醇胺, pH 10,37℃封閉16 h。

  7. 偶聯(lián)完畢,用pH 8 ~ 9、0.1 mol/LTris-HCl緩沖液和pH 4 ~ 5、0.1 M醋酸-醋酸鈉緩沖液依次沖洗,循環(huán)三遍,去除未偶聯(lián)的殘留配基。

  8. 偶聯(lián)后的凝膠可保存在含抑菌劑的溶液中,如20%乙醇。

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