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生物素瓊脂糖凝膠FF的使用方法是什么?

更新時(shí)間:2022-12-20      瀏覽次數(shù):530

生物素瓊脂糖凝膠FF的使用方法是什么?


相關(guān)介紹: 

  生物素瓊脂糖凝膠FF是一種將D-生物素鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的生物親和層析分離介質(zhì)。該介質(zhì)中的生物素配基能高度特異性親和親和素、鏈霉親和素,親和力非常高,可用于親和素、鏈霉親和素及其偶聯(lián)物的固定化,固定化后的產(chǎn)品可應(yīng)用于診斷檢測(cè),蛋白純化等。也可直接用于削弱親和力的親和素、鏈霉親和素的純化。

技術(shù)指標(biāo):

基質(zhì)

4%瓊脂糖凝膠

配基

D-生物素

配基密度

≥2 μmol/ml

填料粒徑

60~180 μm

最大流速

800 cm/h

推薦流速

50-100 cm/h

pH穩(wěn)定性

pH 3~13

0.3 MPa

載量

≥30 mg r-SA/ml


使用方法:

1、色譜柱裝填

(1)所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣,液體最好做脫氣處理。

(2)在柱子下端加入蒸餾水,以除去柱子中的空氣,關(guān)閉柱子出口,在柱內(nèi)保留少量的蒸餾水。

(3)將瓊脂糖凝膠連續(xù)倒入柱子時(shí),要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流,以減少氣泡的產(chǎn)生,讓填料先自然沉降。

(4)柱壓不超過(guò)0.3MPa,如果裝柱系統(tǒng)中無(wú)法測(cè)柱壓,則正常流速下填裝。

(5)填裝好的生物素瓊脂糖凝膠FF柱用2-5個(gè)柱體積的結(jié)合緩沖溶液平衡,建議流速100cm/h,平衡后的柱子可以用于親和素、鏈霉親和素的固定化或純化。

2、上樣

(1)緩沖液選擇:一般選用pH6-8的結(jié)合緩沖液,常用緩沖液有10-00mM 磷酸鈉緩沖液、20-200mM Tris-HCl緩沖液等。在緩沖液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl,以消除離子交換作用。在初次使用生物素瓊脂糖凝膠FF時(shí),推薦使用50mM PBS(50 mM NaH2PO4,0.5M NaCl,NaOH調(diào)節(jié)pH 7.4)作為結(jié)合緩沖液。

(2)樣品處理:樣品的緩沖液應(yīng)與所選結(jié)合緩沖液一致。為保證緩沖液一致,可以在結(jié)合緩沖液中破碎細(xì)菌、或調(diào)解pH與結(jié)合緩沖液一致、或交換至結(jié)合緩沖液(常用方法有透析、超濾、脫鹽柱換液等)、或用結(jié)合緩沖液稀釋2-10倍等。樣品上柱前應(yīng)0.45μm過(guò)濾。

3、洗脫

(1)生物素瓊脂糖凝膠FF如結(jié)合了親和素、或鏈霉親和素之后,由于親和力非常高,通常很難洗脫,可作為固定相用于其他物質(zhì)的檢測(cè)或純化,比如固定了鏈霉親和素-抗原的融合蛋白可用于純化對(duì)應(yīng)的抗體。

(2)如結(jié)合了削弱親和力的親和素、或鏈霉親和素,可在結(jié)合緩沖液中加入1-5mM的D-生物素作為洗脫緩沖液,通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)的方法洗脫,比如本公司的r-SA2、r-SA3、r-cSA3等產(chǎn)品均通過(guò)該法純化獲得。

4、除了柱層析以外,也可能通過(guò)孵育的方式固定親和素、鏈霉親和素。

5、在位清洗

(1)用于純化時(shí),多次使用后需要再生,本產(chǎn)品耐受一定的堿性,推薦使用2-5個(gè)柱體積的0.1M NaOH溶液反向清洗柱子,進(jìn)行再生。

(2)其他方法,比如1-2M NaCl、70%乙醇、30%異丙醇等,也可用于該介質(zhì)的再生。

生物素瓊脂糖凝膠FF的使用方法是什么?

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