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CM-瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用方法

更新時(shí)間:2023-01-02      瀏覽次數(shù):727

CM-瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用方法


CM-瓊脂糖凝膠FF是一種將羧甲基鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的帶有弱酸陽(yáng)離子基團(tuán)的層析分離介質(zhì)。該產(chǎn)品保留了瓊脂糖的親水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu),與生物活性大分子有很好的相容性,具有離子交換容量高,非特異性吸附少,流速快等特點(diǎn),廣泛用于蛋白質(zhì)、核酸、多肽及多糖等的生物大分子實(shí)驗(yàn)室規(guī)模制備和生物制藥、生物工程的工業(yè)化制備。



使用方法:



  1. 裝柱



  1.1 根據(jù)分離目標(biāo)性質(zhì)配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。




  1.2 將凝膠抽干,并用蒸餾水洗滌2次去除保存的乙醇,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿并脫氣。




  1.3 將層析柱垂直固定,底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一段液位。




  1.4 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),使凝膠在柱內(nèi)自由沉降。




  1.5 連結(jié)好柱子頂端活動(dòng)柱頭,打開(kāi)蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)操作流速流過(guò)5柱體積,再使用1.5倍的操作流速流過(guò)5柱體積,調(diào)節(jié)適配柱頭,使其盡量貼近膠面,最后用2 ~ 3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。








注意:




1)所有操作過(guò)程不能引入氣泡,保證裝膠的均勻度。




2)如無(wú)條件做1.2,填料層有氣泡,可進(jìn)行2次裝柱,去除保存的乙醇和氣泡。




3)乙醇等試劑配制的溶液需要脫氣。




  2. 平衡




  將平衡緩沖液以操作流速平衡層析柱,觀察檢測(cè)器的變化,直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變。




  3. 上樣




  切換轉(zhuǎn)換閥進(jìn)行上樣,上樣量根據(jù)樣品的性質(zhì)和層析介質(zhì)的量進(jìn)行選擇,也可進(jìn)行線性實(shí)驗(yàn)找到最佳上樣量;樣品的預(yù)處理:除鹽,置換緩沖液,澄清過(guò)濾(0.45、0.22 μm)等。




  4. 沖洗




  用2 ~ 3個(gè)柱體積的平衡緩沖液沖洗上樣后的層析柱,觀察檢測(cè)器的變化,直到電導(dǎo)、pH等參數(shù)不變,此時(shí)未交換的組分被清洗出去。




  5. 洗脫




  離子交換柱的洗脫可用恒定洗脫、梯度洗脫或者階躍洗脫,一般推薦增大鹽濃度的梯度洗脫進(jìn)行。




  6. 再生




  用高鹽濃度的緩沖液(含1 ~ 2mol/L NaCl)按操作流速?zèng)_洗3 ~ 5個(gè)柱體積,接著用平衡液洗到平衡3 ~ 5個(gè)柱體積。




  若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。




  7. 在位清洗(CIP)




  對(duì)于強(qiáng)結(jié)合蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì),可采用以下流程進(jìn)行在位清洗:1 mol/L NaOH洗2個(gè)柱體積,8 mol/L尿素洗2個(gè)柱體積, 30%異丙醇洗2個(gè)柱體積,平衡緩沖液洗2個(gè)柱體積。




  在位清洗可有效去除介質(zhì)上的雜質(zhì),反向效果更佳。如需要去除內(nèi)毒素?zé)嵩?,可以?0 cm/h速度下,1 mol/L NaOH清洗1 ~ 2h。


CM-瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱的使用方法


 


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