兔抗綿羊紅細胞（溶血素）的使用介紹

利用綿羊細胞與相應抗體（溶血素）結合成的復合物，可激活血清中的補體，導致紅細胞溶解，當紅細胞和溶血素量一定時，在規(guī)定反應的時間內，溶血程度與補體量及活性呈正相關。在接近50%溶血（CH50）時，二者之間近似直線關系，故以50%溶血作為最敏感的判斷終點。以引起50%溶血所需的最小補體量為一個 CH50U，可計算出待測血清中總的補體溶血活性，以 CH50U /ml表示。

產品全稱:凍干兔抗綿羊紅細胞（凍干溶血素）

規(guī)格：0.5ml*10支

效價：1:4000

批號：20230511

保存：-20℃，避光保存，避免反復凍融

有效期：12個月

使用方法：臨用前，每瓶加去離子水或者雙蒸水0.5ml重建后立即使用（10小時內），不得反復使用。

相關實驗測定步驟：（僅供參考）

本試驗主要反映補體經典活化途徑的溶血功能，其結果與補體C1~C9各組成分的量及活性均有關。

1．試劑及配制

(1)緩沖生理鹽水：

①貯存液：

Na2HPO4·12H20   2.85g

KH2PO4               0.27g （加蒸餾水至100毫升，4℃保存）

NaCl                    17.00g

②應用液（緩沖液）:5毫升貯存液加95毫升蒸餾水，再加10%硫酸鎂0.1毫升。當日配制。12小時內使用。

(2)2%綿羊紅細胞：無菌采取綿羊血液，于等量Alsever液中可保存3周。用前以緩沖液

洗3次，并配成2%細胞懸液。必要時可用吸光光度法或細胞計數法使懸液細胞濃度標準化。

(3)溶血素：將本品（效價1:4000)，用緩沖液做1:2000倍稀釋（即1ml溶血素加1999毫升緩沖液）。

(4)待測血清：新鮮血液室溫放置30分鐘，再4℃放置60分鐘，收縮。4℃離心

(3000r/min )10分鐘，取上清，-20℃保存。

2．試管法操作步驟（改良 Mayer 法）

(1)致敏羊紅細胞：2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素（1:2000)，混勻，置37℃水浴30分鐘。

(2)稀釋血清：待測血清0.2ml，加緩沖液3.8ml，稀釋度為1:20。

(3)配制溶血標準管：2%綿羊紅細胞2ml加8ml蒸餾水，混勻，即為全溶血管。取全溶血管液2ml加緩沖液2m1，即為50%溶血管。

(4)按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置37℃水浴30分鐘。第10管為非溶血對照。

             補體 CH50 測定試管法

結果測定：取出試管，2000r/min 離心10分鐘，對照管應不溶血。肉眼比色，選與

50%溶血標準管相近二管，再用分光光度計測（波長542nm、0.5cm比色杯）OD 值，確定與標準管接近者為終點管，然后按下公式計算CH50值：血清補體CH50 ( U /ml)=(1／血清用量）x 稀釋度。

如第5管為終點管，測待測血清中 CH50為66.7U/ml 。血清補體CH50正常值為50-100U/ ml 。

兔抗綿羊紅細胞（溶血素）的使用介紹