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常規(guī)病理染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)的樣本包埋與固定

更新時(shí)間:2023-12-29      瀏覽次數(shù):245

常規(guī)病理染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)的樣本包埋與固定


HE染色實(shí)驗(yàn)

HE染色法,即是蘇木精-伊紅染色法。石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性,主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色;伊紅為酸性染料,主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)分別稱為嗜堿性和嗜酸性;若于兩種染料的親和力都不強(qiáng),則呈中性。一般的組織變化和組織產(chǎn)物都可以通過這一染色法顯示出來。是形態(tài)學(xué)的染色方法。

染色結(jié)果:細(xì)胞核被蘇木精染成鮮明的藍(lán)色,軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)色,粘液呈灰藍(lán)色。細(xì)胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內(nèi)嗜酸性顆粒呈反光強(qiáng)的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。

樣本包埋與固定

1)固定:根據(jù)需要取材后置于福爾馬林中固定48小時(shí)后;

2)洗滌與脫水:將固定后的組織用流水沖洗,去除殘留的固定液和雜質(zhì)。不同濃度的乙醇逐級(jí)脫水,50%、70%、85%95%直至純酒精(無水乙醇),每級(jí)2小時(shí)。70%乙醇中可長(zhǎng)期保存;

3)透明:50%酒精+50%二甲苯中2小時(shí),純二甲苯兩小時(shí),再一次純二甲苯兩小時(shí);

4)浸蠟:先把組織材料塊放在熔化的石蠟和二甲苯的等量混合液浸漬12小時(shí),再先后移入2個(gè)熔化的石蠟液中浸漬各3小時(shí)左右;

5)包埋:將浸好蠟的組織塊放入裝有蠟液的容器中,擺好組織塊位置。待石蠟?zāi)毯髮⒅車嘤嗟氖炄コ瑴?zhǔn)備切片;

6)切片:將切片刀裝在刀片機(jī)的刀架上并固定緊,固定蠟塊底座或蠟塊,調(diào)整蠟塊與刀至合適位置,刀刃與蠟塊表面呈5度角。調(diào)整切片機(jī)上的切片厚度為4-7μm,然后切片。

HE染色

1) 脫蠟:60℃、30min;二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ;

2)水化:將脫蠟后的切片經(jīng)100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、雙蒸水各3min 

3)將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數(shù)分鐘,流水沖洗;

41%鹽酸酒精分化0.5-1min;

5)流水沖洗1小時(shí)后入蒸餾水片刻;

6)碳-酸-鋰飽和水溶液反藍(lán)1min后流水沖洗;

7)入70%和90%酒精中脫水各10min;

8)入酒精伊紅染色液染色2-3min;。

9)脫水透明:染色后的切片經(jīng)純酒精脫水,再經(jīng)二甲苯使切片透明;

10)封片:將已透明的切片滴上中性樹膠,蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后,貼上標(biāo)箋,切片標(biāo)本就可使用;

圖像采集

通過掃描,采集圖片。

Masson染色代測(cè)

Masson染色是用于顯示組織中纖維的染色方法之一,用于膠原纖維染色而經(jīng)典的技術(shù)方法。一般是用兩種或三種陰離子染料混合,膠原纖維呈藍(lán)色,肌纖維,胞質(zhì),纖維素 角蛋白紅細(xì)胞呈紅色,細(xì)胞胞核呈藍(lán)褐色。用來顯示組織中纖維以及炎性因子的染色方法之一。

 


常規(guī)病理染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)的樣本包埋與固定


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