α-凝血酶(凍干粉)使用原理

α-凝血酶（α-Thrombin）是一種高度特異性的絲氨酸蛋白酶，由凝血酶原（Prothrombin，II因子）經(jīng)蛋白水解活化而來(lái)。它在凝血過(guò)程中起著非常重要的作用，不僅能夠促使纖維蛋白凝塊的產(chǎn)生，還負(fù)責(zé)提供反饋信號(hào)來(lái)激活前輔因子：V因子和VIII因子。也可以激活XIII因子和血小板，或者用作血管收縮劑。

在體內(nèi)，活化的X因子（Factor Xa）切割凝血酶原，釋放出活性肽并將凝血酶切割成具有催化活性的α-凝血酶。α-凝血酶由一條輕鏈（A chain）（Mw~6,000）和一條重鏈（B chain）（Mw~31,000）通過(guò)二硫鍵連接而成。某些情況下，α-凝血酶會(huì)發(fā)生自溶生成β-凝血酶和γ-凝血酶。β-凝血酶由對(duì)α-凝血酶A鏈水解并切割含有B鏈糖基化位點(diǎn)的小片段（B1，B2）組合而成。

除了用于凝血研究之外，α-凝血酶還常用來(lái)位點(diǎn)特異性切割融合蛋白。基因重組時(shí)將凝血酶識(shí)別位點(diǎn)插入在目的蛋白與利于后續(xù)純化和/或表達(dá)的多肽或者蛋白之間，通過(guò)凝血酶切割表達(dá)的重組子即可釋放目的蛋白。凝血酶本身可通過(guò)親和層析技術(shù)快速去除。

本品是由勻質(zhì)化的人凝血酶原經(jīng)由Xa因子，Va因子和磷脂活化而得，經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)確保凝血酶原的完-全活化，并以NIH凝血酶的標(biāo)準(zhǔn)品為參考，提供的酶活力不少于3091 NIH U。

使用方法（酶切體系）

產(chǎn)品溶于水，配成的1000 U/ml儲(chǔ)存液，根據(jù)使用量分配于不同的離心管中，凍存于?20℃保存，凝血酶對(duì)不同的融合蛋白切割效率是不一樣的，首先要進(jìn)行小量切割試驗(yàn)。比如固定融合蛋白10ug，加不同量的凝血酶（如0.1U,?0.2U,?0.5U,?1U等),?在不同的溫度(如4度,?16度,?室溫或37度等)下進(jìn)行試驗(yàn)。

建議摸好最佳條件后再進(jìn)行擴(kuò)大酶切實(shí)驗(yàn)

注意事項(xiàng)

1) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2) 本產(chǎn)品僅作科研用途!