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elisa試劑盒夾心法的來由

更新時(shí)間:2017-06-01      瀏覽次數(shù):964

elisa試劑盒的夾心法,是一種很常規(guī)的檢測方法。它是怎么樣工作的,原理,操作又是如何呢??

 

1。在檢測之前,兩種抗體都應(yīng)該被純化,并且必須被標(biāo)記。
2。對于大多數(shù)應(yīng)用程序,一個(gè)聚氯乙烯(PVC)微孔板是的;然而,參考制造商的指南來決定蛋白質(zhì)的結(jié)合板的zui合適的類型。
三.每口井加入約50μL抗體溶液(PBS中的20μg/L),將未標(biāo)記的抗體與每個(gè)井的底部結(jié)合。聚氯乙烯將綁定約100納克/井(300毫微克/平方厘米)。使用的抗體的數(shù)量將取決于個(gè)別化驗(yàn),但如果需要zui大結(jié)合,使用至少1μg /井。這是遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于能力的井,但綁定將發(fā)生更迅速,并結(jié)合溶液可以保存和再次使用
4。培養(yǎng)板在4°C允許完整的結(jié)合。
5。用PBS清洗酶標(biāo)板兩次。500毫升噴瓶方便。抗體溶液沖洗可以把板在合適的容器中刪除。
6。其余位點(diǎn)的蛋白結(jié)合在微孔板必須用封閉液孵育飽和。用3%的威爾斯/ PBS與0.02%*填充到頂部。孵化2小時(shí)通宵在室溫空氣潮濕。
注意:*是一種抑制劑或辣根過氧化物酶。如果HRP標(biāo)記的抗體將用于檢測,不包括*在緩沖液或洗滌溶液中。
7。用PBS清洗酶標(biāo)板兩次。
8。添加50μL抗原解酶標(biāo)板(抗原溶液應(yīng)滴定)。所有的稀釋液應(yīng)在緩沖完成(3%牛血清白蛋白/ PBS)。放置至少2小時(shí),在潮濕空氣中室溫
9。用PBS洗盤子四次。
10、添加標(biāo)記的第二抗體。在初步實(shí)驗(yàn)中可以確定添加量。為了準(zhǔn)確定量,第二抗體應(yīng)過量使用。所有的稀釋液應(yīng)在緩沖了。
11。潛伏在潮濕的氣氛中室溫2小時(shí)或更多。
12、用PBS的幾種變化清洗。
13、添加基材如制造商指示。經(jīng)過建議的孵育時(shí)間已經(jīng)過去,在目標(biāo)波長的光學(xué)密度,可以測量在ELISA板閱讀器。
注意:由于潛在致癌性,一些酶底物被認(rèn)為是有害的。妥善處理,并參考材料安全數(shù)據(jù)表,以妥善處理預(yù)防措施。

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