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人甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒現(xiàn)貨

上海信帆生物供應(yīng)人甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒現(xiàn)貨 ,提供技術(shù)指導(dǎo)和售后服務(wù)。我們銷售的試劑盒,都采用同批次多輪質(zhì)檢,Z大限度地保證了試劑盒Z小的批內(nèi)差、批間差。試劑盒內(nèi)試劑組分,優(yōu)選的,保證每個組分的穩(wěn)定性都能多次經(jīng)過高溫破壞測驗,*的避免了長途運輸和保存過程中抗原抗體的失活。再加上我們嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系,保證了我們的試劑盒優(yōu)良的品質(zhì),受到了客戶廣泛的好評。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-10-19
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詳細(xì)介紹

所有產(chǎn)品僅供科研使用,不能用于食用和醫(yī)療等

人甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒現(xiàn)貨

AFP是嚙齒類動物胚胎期和人胚胎期血清中的主要蛋白甲胎蛋白成分。人類胚胎在宮內(nèi)發(fā)育的第六周左右用雙向擴散法即能測出AFP,到第13周左右可達(dá)到高峰,第16周后AFP的濃度迅速下降而白蛋白濃度上升。在人類胚胎中AFPzui高濃度可達(dá)3—4mg/ml,但新生兒期其血清濃度約為10-50ug/ml,出生后第1周末用雙向擴散法即不再能測出,然而用敏感的方法測定,證明AFP可持續(xù)存在于正常成人的血清中,用硫酸銨沉淀法RIA測獻(xiàn)血員11例,8例AFP在10ng/ml以下。用放射火箭自顯影測定學(xué)員206例的AFP,均在25ng/ml(4-25ng/ml),因此說明AFP的產(chǎn)生并無*的基因控制。
AFP的合成部位主要是在嚙齒動物及人類胚胎的肝臟,但也可在卵黃囊及胃腸道等。有人觀察到一個肝癌中,只有不到20%的肝細(xì)胞含有AFP,提示AFP的產(chǎn)生只是細(xì)胞群中的少數(shù)在活動。另一種解釋是所有細(xì)胞都制造AFP,但只有少數(shù)細(xì)胞可貯存AFP。AFP可出現(xiàn)于正常人,表示某些細(xì)胞可繼續(xù)合成AFP維持整個一生。
人類的AFP屬于α球蛋白,電泳運動在白蛋白與球蛋白之間,分子量約為64,000—72,000,沉淀系數(shù)為4.5。此蛋白約有18種氨基酸組成,碳水化合物約占4%。來源于胎兒的AFP呈*電泳運動,從腫瘤來者含有4種變異體或叫亞成分,其電泳運動有輕微差別,這種差別主要在碳水化合物的含量上而不在肽鏈的改變。
對于胎兒期AFP所起的作用仍不太清楚。從其濃度變化規(guī)律來看,AFP好像是成人血中白蛋白的相應(yīng)物質(zhì),而白蛋白是AFP的替代物。白蛋白在控制新生兒溶血性黃疸中起重要作用,而AFP可能主要在于維持正常妊娠,并保持胚胎不受母體排斥,已知AFP能結(jié)合求偶素。

上海信帆生物是一家專業(yè)的elisa試劑盒供應(yīng)商,銷售各種進(jìn)口和國產(chǎn)品牌的elisa試劑盒。對于elisa試劑盒,我們提供完善的質(zhì)量保證,專業(yè)的技術(shù)解答,耐心周到的售后服務(wù),成為國內(nèi)多家科研機構(gòu)和高校的試劑盒供應(yīng)商。

本試劑盒含量是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將待測物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系
人甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒現(xiàn)貨
試劑樣本收集和處理方法
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的樣本,及時儲存在4℃?zhèn)溆?。對于隔天再檢測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?,有條件的,-70℃凍存?zhèn)溆?。?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
液體類標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參? 照此實行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
5.培養(yǎng)細(xì)胞:檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
6.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
7.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
8.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
詳細(xì)操作步驟
1. 加樣:標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個濃度點10個孔,每個濃度設(shè)定平行孔,加入50微升不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,空白孔設(shè)定1個孔加入50微升蒸餾水(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔,在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
2. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
5. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
6. 溫育:操作同3。
7. 洗滌:操作同5。
8. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
9. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
10. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
試劑盒操作過程中有什么注意事項
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
11. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
計算方法
操作完成之后,詳細(xì)的計算方式是:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
人甲胎蛋白(AFP)ELISA試劑盒
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